Técnica de hibridación de ADN (Microarrays) para la detección de Neumococo

Técnica de hibridación de ADN (Microarrays)

Streptococcus pneumoniae (neumococo)

El diagnóstico está basado en un molde de ADN, la técnica utilizada es hibridación mediante la tecnología de microarrays para detectar IgG específicas de tipo CPS en suero, utilizando una colección de 22 CPS de S. pneumoniae impresas en microarrays. Las enzimas de restricción empleadas son EcoRI, Hindill y BamHl, las que permiten un análisis proteómico con anticuerpos y así determinar la amplia gama de patrones de antígenos neumocócicos. La sonda especifica utilizada es: ABLMLL Dual color Dual fusión, el blotting es de tipo Southern Blot. La electroforesis, comprobó la gran afinidad de la IgG por los antígenos potenciales de S.pneumoniae. Esta técnica tiene ventajas como rapidez, sensibilidad y capacidad de analizar múltiples muestras simultáneamente. 

Figura 1. Métodos y materiales 

Figura 2. Unión de antisueros neumocócicos a CPS impresas en microarrays

Las CPS se imprimieron por triplicado en tres concentraciones diferentes (0,1, 0,03 y 0,01 mg/ml), y la unión de los antisueros en ausencia o presencia de CPS seleccionadas en solución se detectó usando estreptavidina marcada con AF647 como paso final, como se describe en la Sección Experimental.
(A) Diseño de impresión CPS. 
(B – E) Imágenes representativas de señales fluorescentes observadas para la unión del suero tipo 1 (B) y del suero combinado T en ausencia (C) o presencia de CPS 2 (D) o CPS 20 (E). 
(F – N) Gráfico de intensidades de fluorescencia para la unión del suero tipo 1 ∓ CPS 1 (F), suero de grupo 19 ∓ CPS 19A (G) o 19F (H), suero combinado R ∓ CPS 3 (I) o 4 ( J), grupo S ∓ CPS 5 (K) u 8 (L), y grupo T ∓ CPS 2 (M) o 20 (N). 
Las intensidades de fluorescencia en ausencia de CPS en solución se representan mediante columnas llenas, mientras que las de los ensayos de competencia se representan mediante columnas rayadas. Los datos mostrados corresponden a la media de puntos por triplicado y las barras de error indican la desviación estándar de la media.

Referencias bibliográficas: 

1. Campanero-Rhodes MA, Lacoma A, Prat C, García E, Solís D. Development and evaluation of a microarray platform for detection of serum antibodies against streptococcus pneumoniae capsular polysaccharides. Anal Chem [Internet]. 2020 [citado el 20 de diciembre de 2023];92(11):7437–43. Disponible en: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32407098/